Plásmido CRISPR de Activación (h) CECR2: sc-405018-ACT

CECR2 codifica una proteína asociada a la cromatina que actúa como regulador transcripcional mediante el reconocimiento, dependiente de bromodominio, de histonas acetiladas, vinculando el estado epigenético con los programas de expresión génica. Se le ha implicado en la remodelación de la cromatina y en la coordinación de vías del desarrollo y la diferenciación, con funciones descritas en el desarrollo del tubo neural y el control de redes transcripcionales. La actividad alterada de CECR2 se ha asociado con una señalización epigenética desregulada en procesos relevantes para el cáncer, incluidos la invasión, la señalización inflamatoria y las transiciones de estado celular. Como factor nuclear de la cromatina, CECR2 se estudia por su contribución a la especificación de linaje, la fidelidad transcripcional y la remodelación del epigenoma asociada a enfermedades.

CECR2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CECR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CECR2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CECR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CECR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CECR2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CECR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CECR2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CECR2 en células tumorales con expresión de CECR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.