CECR2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405018-ACT

CECR2 codifica una proteina associata alla cromatina che funziona da regolatore trascrizionale attraverso il riconoscimento, dipendente dal bromodominio, degli istoni acetilati, collegando lo stato epigenetico ai programmi di espressione genica. È implicata nel rimodellamento della cromatina e nel coordinamento di vie di sviluppo e differenziamento, con ruoli descritti nello sviluppo del tubo neurale e nel controllo di reti trascrizionali. Un’alterata attività di CECR2 è stata associata a una deregolazione della segnalazione epigenetica in processi rilevanti per il cancro, inclusi invasione, segnalazione infiammatoria e transizioni dello stato cellulare. In quanto fattore nucleare della cromatina, CECR2 è oggetto di studio per il suo contributo alla specificazione di linea, alla fedeltà trascrizionale e al rimodellamento dell’epigenoma associato alle malattie.

CECR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CECR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CECR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CECR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CECR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CECR2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CECR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CECR2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CECR2 nelle cellule tumorali con espressione di CECR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.