CDw75/ST6GAL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402881-ACT

ST6GAL1（CDw75）は、ゴルジ体に局在するβ-ガラクトシドα2,6-シアル酸転移酵素をコードしており、N型糖鎖にα2,6結合シアル酸を付加することで、細胞表面糖タンパク質の構成や受容体機能を形作ります。糖鎖依存的な相互作用を調節することにより、ST6GAL1はタンパク質輸送、免疫認識、さらに接着や生存経路に関連するシグナル出力に影響を及ぼします。ST6GAL1活性およびα2,6-シアリル化パターンの変化は、分化制御の破綻、炎症性シグナル、腫瘍関連の糖鎖修飾フェノタイプと関連づけられています。ヒトのモデル系では、レクチン結合、B細胞関連のCDw75エピトープ、ならびに糖鎖修飾依存的な受容体制御への影響という観点から、ST6GAL1は広く研究されています。

CDw75/ST6GAL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ST6GAL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CDw75/ST6GAL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ST6GAL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はST6GAL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CDw75/ST6GAL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のST6GAL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCDw75/ST6GAL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびST6GAL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCDw75/ST6GAL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。