Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CDKAL1 Plasmide Double Nickase (m): sc-427224-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CDKAL1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CDKAL1 Double Nickase Plasmid (m) e il CDKAL1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cdkal1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CDKAL1 Antibody (E-9): sc-393447
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CDKAL1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-427224-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Cdkal1** codifica **CDKAL1**, una metiltiotrasferasi che modifica il tRNA^Lys(UUU) in posizione 37 (ms2t6A37), favorendo una decodifica accurata dei codoni della lisina durante la traduzione. Mantenendo l’accuratezza della traduzione, CDKAL1 influenza la proteostasi e le risposte cellulari allo stress, con particolare rilevanza per la funzione delle cellule secernenti e la regolazione metabolica. Studi genetici e funzionali collegano CDKAL1 all’omeostasi del glucosio e alle prestazioni delle cellule β pancreatiche, rendendolo un locus frequentemente studiato nelle vie associate al diabete. Nei sistemi murini, l’alterazione di Cdkal1 viene utilizzata per esaminare come le modifiche del tRNA influenzino la sintesi proteica, lo stress del reticolo endoplasmatico (ER) e i fenotipi metabolici a valle.
CDKAL1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cdkal1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cdkal1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cdkal1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cdkal1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.