Cdk7 Plasmide Double Nickase (h): sc-400665-NIC

CDK7 codifica la chinasi ciclina‑dipendente 7 (Cdk7), un componente catalitico centrale del complesso CAK (CDK‑activating kinase), che fosforila e attiva molteplici CDK del ciclo cellulare. Cdk7 opera anche all’interno di TFIIH fosforilando il dominio C‑terminale della RNA polimerasi II, collegando l’avvio della trascrizione e la liberazione dal promotore ai programmi di integrità genomica. Attraverso questi ruoli, CDK7 integra la progressione del ciclo cellulare, il controllo trascrizionale e la segnalazione della risposta al danno al DNA, influenzando la proliferazione e l’adattamento allo stress. Un’attività e una dipendenza da CDK7 deregolate sono state riportate in diversi contesti tumorali, rendendolo un bersaglio utile per analizzare la “dipendenza” trascrizionale, il controllo dei checkpoint e i fenotipi di stress replicativo nelle cellule umane.

Cdk7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDK7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDK7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDK7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDK7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.