Cdk6 Plasmide Double Nickase (h): sc-400309-NIC

CDK6 codifica la chinasi ciclina-dipendente 6 (Cdk6), una chinasi serina/treonina che si associa alle cicline di tipo D per fosforilare le proteine della famiglia RB e promuovere la progressione dalla fase G1 alla fase S. Oltre al controllo del ciclo cellulare, Cdk6 si interfaccia con gli output dei segnali mitogeni delle vie MAPK e PI3K/AKT e contribuisce a programmi trascrizionali che coordinano proliferazione e differenziamento nelle linee ematopoietiche e in altre linee cellulari. Un’attività di CDK6 deregolata è spesso implicata nella proliferazione oncogenica e in un alterato controllo dei checkpoint; inoltre, viene studiata insieme ad altre CDK correlate nei meccanismi di dipendenza dai fattori di crescita, senescenza e impegno di linea. In quanto nodo che integra la segnalazione proliferativa con il macchinario del ciclo cellulare, CDK6 è comunemente analizzato in modelli di biologia tumorale e di disturbi proliferativi.

Cdk6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDK6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDK6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDK6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDK6 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.