CD68 Plasmide Double Nickase (h): sc-400211-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD68 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD68 Double Nickase Plasmid (h) e il CD68 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CD68. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD68 Antibody (KP1): sc-20060
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD68 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400211-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD68 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400211-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD68 codifica una proteina di membrana lisosomiale/endosomiale fortemente glicosilata, particolarmente abbondante nei monociti e nei macrofagi tissutali, ed è ampiamente utilizzata come marcatore della linea fagocitaria mononucleata. CD68 partecipa al traffico vescicolare e alla maturazione del fagolisosoma, favorendo l’assorbimento e la processazione di lipidi, patogeni e detriti cellulari. Attraverso il suo ruolo nella fagocitosi, nella gestione degli antigeni e nella segnalazione dell’immunità innata, le cellule mieloidi CD68-positive influenzano le reti di citochine infiammatorie e i programmi di rimodellamento tissutale. Alterazioni dell’espressione di CD68 e l’accumulo di macrofagi vengono spesso analizzati in contesti quali la biologia della placca aterosclerotica, le patologie infiammatorie croniche, la neuroinfiammazione e la polarizzazione dei macrofagi associati ai tumori.
CD68 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD68 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD68. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD68. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD68 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.