CD59 Plasmide Double Nickase (h): sc-417670-NIC

CD59 (protectina) è un regolatore di membrana del complemento ancorato tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che inibisce l’assemblaggio del complesso terminale di attacco alla membrana (C5b-9) sulle cellule dell’ospite. Limitando la citolisi mediata dal complemento e contenendo il danno “bystander”, CD59 contribuisce a mantenere l’omeostasi immunitaria alla superficie cellulare e modula la segnalazione infiammatoria nei compartimenti vascolare, ematopoietico ed epiteliale. Alterazioni dell’espressione o della funzione di CD59 sono associate a un’attivazione del complemento non regolata e contribuiscono a meccanismi di malattia che coinvolgono emolisi, neuroinfiammazione e danno tissutale nelle patologie guidate dal complemento. Essendo una proteina di superficie ampiamente espressa, CD59 è utilizzata anche per studiare la biologia dei microdomini di membrana, l’elusione immunitaria e il dialogo tra immunità innata e programmi di sopravvivenza cellulare.

CD59 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD59 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD59. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD59. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD59 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.