CD39 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-419549-LAC

Entpd1 codifica a ectonucleotidase CD39 (ENTPD1), uma enzima de superfície celular que hidrolisa ATP e ADP extracelulares em AMP, modulando a sinalização purinérgica nos compartimentos vascular, imune e estromal em camundongos. Ao regular a disponibilidade de nucleotídeos, a CD39 influencia a sinalização inflamatória, as respostas de plaquetas e do endotélio e o equilíbrio entre sinais de perigo mediados por ATP e vias imunorregulatórias geradoras de adenosina, em conjunto com a CD73. A atividade da CD39 está associada à modulação da ativação de leucócitos, da produção de citocinas e das respostas a lesão tecidual, tornando o Entpd1 um alvo relevante em modelos de inflamação, trombose, lesão por isquemia-reperfusão e regulação imune associada a tumores. Sua expressão é comumente estudada em células T reguladoras, populações mieloides e endotélio, onde o metabolismo de nucleotídeos extracelulares controla a comunicação célula–célula.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD39 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Entpd1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD39 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Entpd1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CD39. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Entpd1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.