CD137L Plasmide Double Nickase (h): sc-404974-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD137L Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD137L Double Nickase Plasmid (h) e il CD137L Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TNFSF9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD137L Antibody (G-10): sc-398933
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD137L Plasmide Double Nickase (h) | sc-404974-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD137L Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404974-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFSF9 codifica CD137L (ligando di 4-1BB), un membro della superfamiglia del TNF espresso sulle cellule presentanti l’antigene, che si lega a CD137 (TNFRSF9) sui linfociti T attivati e sulle cellule NK, modulando la segnalazione co-stimolatoria. Le interazioni CD137L–CD137 favoriscono la formazione della sinapsi immunologica e regolano produzione di citochine, proliferazione e sopravvivenza attraverso programmi di segnalazione collegati a NF-κB e MAPK. Oltre alla segnalazione “in avanti” verso i linfociti CD137-positivi, CD137L può anche trasmettere segnali “retrogradi” nelle cellule mieloidi, influenzandone lo stato di attivazione, la differenziazione e l’output infiammatorio. Un’attività deregolata di TNFSF9/CD137L è stata implicata nell’infiammazione cronica e nell’autoimmunità ed è spesso studiata in immunologia dei tumori, dove il contesto immunitario e le vie dei checkpoint modulano le risposte dipendenti da CD137L.
CD137L Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TNFSF9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TNFSF9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TNFSF9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TNFSF9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.