CD137 Plasmide Double Nickase (h): sc-405068-NIC

TNFRSF9 (CD137, 4-1BB) è un membro inducibile della superfamiglia dei recettori del TNF espresso sulle cellule T attivate, sulle cellule NK e su altri sottotipi immunitari, dove funziona come checkpoint co-stimolatorio che controlla attivazione, sopravvivenza e differenziazione effettrice. Il legame di CD137 con il suo ligando innesca il reclutamento di adattatori e l’attivazione a valle delle vie di segnalazione NF-κB, MAPK e PI3K/AKT, sostenendo produzione di citochine, proliferazione e fitness metabolica. Questa via modella le interazioni cellula immunitaria–cellula immunitaria nei tessuti infiammati e nel microambiente tumorale ed è spesso studiata nel contesto di infiammazione cronica, autoimmunità e immunobiologia del cancro. Alterazioni dell’espressione di TNFRSF9 o della dinamica della sua segnalazione possono modulare le risposte citotossiche e gli stati di esaurimento immunitario, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione immunitaria.

CD137 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TNFRSF9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TNFRSF9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TNFRSF9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TNFRSF9 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.