CD100 Plasmide Double Nickase (h): sc-405956-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD100 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD100 Double Nickase Plasmid (h) e il CD100 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SEMA4D. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD100 Antibody (C-3): sc-390675
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD100 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405956-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD100 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405956-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SEMA4D codifica CD100, una semaforina transmembrana che esiste anche come ectodominio solubile e che svolge funzioni di segnalazione bidirezionale tramite recettori quali plexin-B1/B2 e CD72. CD100 regola l’attivazione delle cellule immunitarie, le soglie di segnalazione delle cellule B, la produzione di citochine e la migrazione dei leucociti; inoltre influenza la guida neuronale e le risposte angiogeniche attraverso vie associate alle GTPasi della famiglia Rho e a PI3K. Attraverso questi processi, CD100 è implicata nel modulare le interazioni tra tumore e sistema immunitario, il rimodellamento tissutale infiammatorio e i meccanismi neuroinfiammatori. Una segnalazione SEMA4D/CD100 deregolata è stata associata ad alterata sorveglianza immunitaria e a infiammazione patologica in molteplici contesti di malattia.
CD100 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SEMA4D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SEMA4D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SEMA4D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SEMA4D interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.