CatSper Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403796

Panoramica

CATSPER1 codifica CatSper, una subunità di un canale ionico specifico degli spermatozoi, necessaria per l’ingresso di calcio che guida la motilità iperattivata e sostiene la segnalazione associata alla capacitazione. L’attività del canale CatSper integra le variazioni del potenziale di membrana e la dinamica intracellulare del Ca2+ per regolare i pattern di battito del flagello e gli eventi di fosforilazione a valle essenziali per la fecondazione. L’alterazione di CATSPER1 è collegata a una compromissione della funzione spermatica ed è associata a fenotipi di infertilità maschile, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici sul controllo della motilità degli spermatozoi. In quanto componente di un complesso di canale multisubunità, CatSper1 rappresenta anche un punto di accesso per investigare l’assemblaggio, il traffico intracellulare e la regolazione dei canali ionici spermatici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CatSper (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CATSPER1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CATSPER1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CATSPER1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CatSper.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CATSPER1 per lo studio della segnalazione di CatSper, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CATSPER1 critici per la funzione di CatSper
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CATSPER1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CatSper CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CatSper CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CATSPER1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CatSper Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CatSper (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CATSPER1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CATSPER1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.