CaM III Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400953-ACT

O gene humano **CALM3** codifica a **calmodulina III (CaM III)**, um sensor ubíquo de ligação a **Ca2+** que transduz sinais intracelulares de cálcio em alterações coordenadas na atividade enzimática, na função de canais iônicos e na expressão gênica. Após a ligação ao **Ca2+**, a CaM III modula efetores-chave, incluindo **CaMKs**, **calcineurina** e **fosfodiesterases**, integrando a sinalização envolvida na excitabilidade neuronal, na condução cardíaca, na secreção e na remodelação do citoesqueleto. As vias dependentes de **CALM3** intersectam programas transcricionais mediados por **MAPK/ERK** e **CREB**, moldando a progressão do ciclo celular, a diferenciação e as respostas ao estresse. A desregulação da sinalização por **Ca2+/calmodulina** está implicada na suscetibilidade a arritmias, em fenótipos do neurodesenvolvimento e na reprogramação de vias de sinalização associada ao câncer, o que reforça sua ampla relevância em estudos mecanísticos.

CaM III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CALM3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CaM III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CALM3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CALM3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CaM III. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CALM3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CaM III no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CaM III em células tumorais com expressão de CALM3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.