Plasmide Double Nickase (h) CaM II: sc-400952-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CaM II correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CaM II Double Nickase (h) et le plasmide CaM II Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CALM2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CaM II | sc-400952-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CaM II | sc-400952-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **CALM2** code la calmoduline (**CaM II**), un capteur de Ca2+ exprimé de façon ubiquitaire qui convertit des signaux calciques transitoires en modifications coordonnées de l’activité enzymatique, de l’ouverture/fermeture des canaux ioniques et des programmes transcriptionnels. En se liant à des cibles telles que les **CaMK**, la **calcineurine**, les **phosphodiestérases** et les **synthases de l’oxyde nitrique**, et en les régulant, **CALM2** contribue au couplage excitation–contraction, à la plasticité synaptique, au trafic vésiculaire et au contrôle du cycle cellulaire. La signalisation dépendante de **CALM2** s’articule avec les voies des kinases Ca2+/calmoduline, les cascades **MAPK** et le remodelage du cytosquelette pour façonner des réponses cellulaires dépendantes du stimulus. Une signalisation de la calmoduline dérégulée, ainsi que des variants des gènes de la calmoduline, sont associés à une excitabilité électrique anormale et à une homéostasie du Ca2+ altérée, ce qui motive des études mécanistiques dans des cardiomyocytes, des neurones et d’autres modèles de cellules excitables.
CaM II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CALM2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CALM2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CALM2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CALM2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.