calsequestrin 2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402912-NIC

CASQ2 codifica la calsequestrina 2, una proteina legante il Ca2+ ad alta capacità e moderata affinità, localizzata nel lume del reticolo sarcoplasmatico dei cardiomiociti, dove tampona il Ca2+ e contribuisce a modellare l’accoppiamento eccitazione–contrazione. Interagendo con i complessi del recettore della rianodina e con proteine accessorie luminali, la calsequestrina 2 contribuisce alle dinamiche di rilascio del Ca2+, alla stabilità dei depositi e alla segnalazione calcio-dipendente che coordina la contrazione e il rilassamento cardiaci. L’alterazione della funzione di CASQ2 è associata a una gestione intracellulare anomala del Ca2+ e a fenotipi aritmogenici innescati dallo stress, rendendolo un nodo chiave per lo studio dell’omeostasi del Ca2+ nel reticolo sarcoplasmatico. CASQ2 è quindi ampiamente utilizzato nella ricerca sull’elettrofisiologia cardiaca, sulle reti del ciclo del calcio e sui meccanismi della suscettibilità ereditaria alle aritmie.

calsequestrin 2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CASQ2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CASQ2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CASQ2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CASQ2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.