Calregulin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400775-NIC

O CALR humano codifica a calreticulina, uma chaperona luminal do retículo endoplasmático e proteína de alta capacidade de ligação a Ca²⁺, que auxilia o dobramento e o controle de qualidade de glicoproteínas por meio do ciclo calnexina/calreticulina e da degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD). A calreticulina regula a homeostase do cálcio intracelular e se conecta à sinalização de estresse do retículo endoplasmático e à resposta a proteínas mal dobradas (UPR), influenciando a apoptose, a adesão celular e processos relacionados ao sistema imune por alterações na sinalização dependente de cálcio. A atividade desregulada de CALR tem sido associada a mudanças na proteostase e na adaptação ao estresse na biologia do câncer, bem como a mutações de CALR ligadas a neoplasias mieloproliferativas, que perturbam redes de sinalização a jusante. Essas características fazem do CALR um alvo frequentemente estudado por conectar a proteostase do retículo endoplasmático, a sinalização por cálcio e as respostas celulares ao estresse.

Calregulin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CALR em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CALR. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CALR. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CALR interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.