Caldesmon Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402040-NIC

CALD1 codifica a caldesmon, uma proteína que se liga à actina e à calmodulina e que modula as interações actomiosina e estabiliza a arquitetura do citoesqueleto em células de músculo liso e em células não musculares. Ao regular a dinâmica dos filamentos de actina e a atividade ATPase da miosina de forma dependente de cálcio, a caldesmon coordena a organização das fibras de stress, a renovação das adesões focais e respostas contráteis que influenciam a forma e a motilidade celular. A função de CALD1 cruza-se com a remodelação do citoesqueleto impulsionada por GTPases Rho e com vias de sinalização que acoplam a tensão mecânica a programas transcricionais. Alterações na expressão de caldesmon ou no equilíbrio entre isoformas têm sido associadas a mudanças em fenótipos de migração e invasão celular na biologia do cancro e a um comportamento desregulado do músculo liso, relevante para a remodelação vascular e para processos fibroproliferativos.

Caldesmon O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CALD1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CALD1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CALD1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CALD1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.