CAD Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403028-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CAD Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- CAD CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal CAD CRISPR Activation Plasmid (h) e dal CAD CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di DFFB. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CAD Antibody (F-11): sc-374067
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CAD Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-403028-ACT | 20 µg | $397.00 |
La subunità beta del fattore di frammentazione del DNA (DFFB), nota anche come DNasi attivata dalle caspasi (CAD), è un’endonucleasi che esegue il taglio internucleosomale del DNA durante l’apoptosi dopo il rilascio dal suo inibitore ICAD. Una volta attivata, CAD contribuisce alla frammentazione della cromatina, alla formazione dei corpi apoptotici e alla segnalazione di danno al DNA, collegando la morte cellulare programmata alle vie di mantenimento dell’integrità del genoma. L’attività di DFFB è quindi rilevante per studi sulla regolazione dell’apoptosi, l’omeostasi immunitaria e le risposte cellulari allo stress genotossico. Un controllo alterato della frammentazione apoptotica del DNA è stato associato a sopravvivenza oncogena, fenotipi infiammatori e processi neurodegenerativi, rendendo DFFB un nodo utile per indagini meccanicistiche.
CAD Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DFFB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
CAD Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DFFB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DFFB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CAD. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DFFB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CAD nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CAD nelle cellule tumorali con espressione di DFFB silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.