C4BP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419394

Panoramica

Il gene murino **C4bp** codifica la **proteina legante C4b (C4BP)**, un regolatore solubile delle vie classica e lectinica del complemento che si lega alla C4b attivata per promuoverne l’inattivazione mediata dal fattore I e limitare la formazione della convertasi di C3. Limitando l’amplificazione del complemento, C4BP contribuisce a mantenere l’omeostasi immunitaria, favorisce la rimozione dei complessi immuni e del materiale apoptotico e modula la segnalazione infiammatoria nel microambiente extracellulare. Un controllo disregolato del complemento che coinvolge C4BP è stato implicato in contesti quali autoimmunità, infiammazione associata a infezioni e danno tissutale, in cui un’attivazione eccessiva del complemento contribuisce alla patologia. In quanto nodo regolatorio del complemento, **C4bp** è rilevante per lo studio dell’immunità innata, delle reti infiammatorie e delle interazioni ospite–patogeno in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C4BP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene C4bp in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del C4bp insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto C4bp a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C4BP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di C4bp per lo studio della segnalazione di C4BP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni C4bp critici per la funzione di C4BP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di C4bp per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C4BP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal C4BP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus C4bp. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C4BP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR C4BP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia C4bp per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio C4bp definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.