C4BP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419394

Übersicht

Mouse C4bp kodiert das C4b-bindende Protein (C4BP), einen löslichen Regulator der klassischen und der Lektin-Komplementkaskade, der an aktiviertes C4b bindet, um die faktor‑I‑vermittelte Inaktivierung zu fördern und die Bildung der C3‑Konvertase zu begrenzen. Durch die Begrenzung der Komplementamplifikation trägt C4BP zur Aufrechterhaltung der Immunhomöostase bei, unterstützt die Clearance von Immunkomplexen und apoptotischem Material und moduliert entzündliche Signalwege im extrazellulären Milieu. Eine gestörte Komplementkontrolle unter Beteiligung von C4BP wurde in Zusammenhängen wie Autoimmunität, infektionsassoziierter Entzündung und Gewebeschädigung in Verbindung gebracht, bei denen eine übermäßige Komplementaktivierung zur Pathologie beiträgt. Als Knotenpunkt der Komplementregulation ist C4bp für die Untersuchung der angeborenen Immunität, entzündlicher Netzwerke und Wirt‑Pathogen‑Interaktionen in Mausmodellen relevant.

Das C4BP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des C4bp-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des C4bp-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von C4bp nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C4BP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von C4bp-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C4BP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf C4bp-Exone abzielen, die für die C4BP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere C4bp-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C4BP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom C4BP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des C4bp-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C4BP HDR-Plasmid (m) und C4BP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von C4bp-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten C4bp-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.