C1r Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405842

Panoramica

C1R codifica C1r del complemento, una proteasi serinica che, insieme a C1q e C1s, forma il complesso C1 per avviare la via classica del complemento. Dopo l’attivazione, C1r va incontro ad autoattivazione e scinde C1s, propagando la segnalazione della cascata del complemento che promuove opsonizzazione, rimozione dei complessi immuni e generazione di mediatori infiammatori. L’attività di C1r è collegata alla regolazione della sorveglianza immunitaria innata e al crosstalk con le vie della coagulazione e dell’infiammazione nel compartimento extracellulare. La disregolazione di C1R è stata associata ad alterati stati di attivazione del complemento e a patologie immuno-mediate, rendendolo rilevante per studi sulla biologia del complemento e sui meccanismi delle malattie legate all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C1r (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene C1R in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del C1R insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto C1R a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C1r.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di C1R per lo studio della segnalazione di C1r, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni C1R critici per la funzione di C1r
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di C1R per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C1r CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal C1r CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus C1R. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C1r Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR C1r (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia C1R per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio C1R definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.