C11orf65 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417466-ACT

C11orf65（chromosome 11 open reading frame 65）は、十分に特徴づけられていないヒトタンパク質をコードする遺伝子で、候補となるミトコンドリア因子として注釈されており、オルガネラの恒常性や生体エネルギー制御との関連を示すエビデンスが近年蓄積しつつあります。予測される局在や保存性に基づき、C11orf65はミトコンドリア遺伝子発現、酸化的リン酸化の維持、ならびに代謝の再配線に影響する細胞ストレス応答の文脈でしばしば研究されています。ミトコンドリア維持経路の撹乱は、活性酸素種（ROS）の処理やアポトーシス感受性を変化させ得るため、ミトコンドリア機能障害の関与が示唆される神経筋・代謝系の表現型研究においてC11orf65は注目されています。機能アノテーションがなお限定的であることから、内在性C11orf65の発現を制御下で調節することは、下流の転写・プロテオーム変化をマッピングする上で有用です。

C11orf65 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C11orf65の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C11orf65 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C11orf65 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC11orf65転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C11orf65の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC11orf65遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC11orf65依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC11orf65発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC11orf65経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。