c-Myb Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400752-ACT

MYB codifica o fator de transcrição c-Myb, um regulador de ligação ao DNA específico de sequência que controla programas de proliferação, comprometimento de linhagem e diferenciação, particularmente nos compartimentos hematopoiético e de células imunes. O c-Myb integra sinais de redes transcricionais de citocinas e do desenvolvimento para modular a progressão do ciclo celular, a sobrevivência e a maturação por meio da regulação coordenada de genes-alvo a jusante. A atividade desregulada de MYB tem sido associada a estados de diferenciação alterados e à manutenção de sinais proliferativos em múltiplos contextos relevantes para malignidades, incluindo leucemias e linfomas, e também está implicada no remodelamento transcricional em determinados tumores sólidos. Essas propriedades tornam MYB um nó-chave para dissecar circuitos de regulação gênica, transcrição dependente de cromatina e decisões de destino celular específicas de contexto.

c-Myb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

c-Myb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de c-Myb. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de c-Myb no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via c-Myb em células tumorais com expressão de MYB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.