BUBR1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403807-ACT

BUB1B は、紡錘体組立チェックポイントの中核因子である BUBR1 をコードしており、キネトコア‐微小管結合を監視し、有糸分裂チェックポイント複合体を介して APC/C 活性を制御することで、染色体分配の正確性を担保します。BUBR1 は有糸分裂のタイミング、姉妹染色分体の結合（コヒージョン）、および誤り訂正に寄与し、その結果として細胞分裂中のゲノム安定性を維持します。BUB1B／BUBR1 機能の破綻は、染色体不安定性や異数性と関連しており、これらはがん生物学や、細胞周期制御に影響する発達障害の研究で頻繁に取り上げられる特徴です。チェックポイント制御因子としての BUBR1 は、分裂期ストレス応答や増殖依存的な表現型を解析するための機序上の結節点としても利用されています。

BUBR1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BUB1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BUBR1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BUB1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBUB1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BUBR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBUB1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBUBR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBUB1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBUBR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。