BTN2A2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433634

Panoramica

Btn2a2 codifica la butirofilina della sottofamiglia 2 membro A2 (BTN2A2), una proteina transmembrana della superfamiglia delle immunoglobuline che agisce come regolatore co‑inibitorio delle risposte delle cellule T. Nei topi, l’espressione di BTN2A2 sulle cellule presentanti l’antigene modula le soglie di attivazione delle cellule T, favorendo la tolleranza periferica limitando la proliferazione e la produzione di citochine. Questa attività, simile a quella dei checkpoint immunitari, colloca BTN2A2 in vie che governano la segnalazione nella sinapsi immunologica, la costimolazione e il mantenimento dell’omeostasi immunitaria. In modelli sperimentali, una segnalazione deregolata di BTN2A2 è stata collegata ad alterazioni delle risposte infiammatorie rilevanti per autoimmunità, infezioni e interazioni tra tumore e sistema immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BTN2A2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Btn2a2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Btn2a2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Btn2a2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BTN2A2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Btn2a2 per lo studio della segnalazione di BTN2A2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Btn2a2 critici per la funzione di BTN2A2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Btn2a2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BTN2A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BTN2A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Btn2a2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BTN2A2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BTN2A2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Btn2a2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Btn2a2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.