BRAP Plasmide Double Nickase (h): sc-403847-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BRAP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BRAP Double Nickase Plasmid (h) e il BRAP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BRAP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BRAP Antibody (D-5): sc-166012
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BRAP Plasmide Double Nickase (h) | sc-403847-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BRAP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403847-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRAP (proteina associata a BRCA1) è una ligasi E3 dell’ubiquitina citoplasmatica che modula la segnalazione MAPK legando e ubiquitinando componenti quali KSR1, influenzando così ampiezza e durata della via RAF–MEK–ERK. Attraverso un controllo dipendente dall’ubiquitina della stabilità e del traffico delle proteine, BRAP incide sulla progressione del ciclo cellulare, sulla differenziazione e sulla segnalazione in risposta allo stress. Studi genetici e funzionali hanno collegato l’alterazione di BRAP a cambiamenti nella segnalazione proliferativa e a una proteostasi deregolata, processi rilevanti per la biologia del cancro e per i meccanismi delle patologie neurovascolari. Il suo ruolo all’intersezione tra ubiquitinazione e regolazione della via MAPK rende BRAP un nodo utile per analizzare le reti di trasduzione del segnale e di turnover proteico nelle cellule umane.
BRAP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BRAP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BRAP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BRAP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BRAP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.