Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
BLVRB Plasmide Double Nickase (m): sc-433230-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BLVRB Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BLVRB Double Nickase Plasmid (m) e il BLVRB Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Blvrb. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BLVRB Antibody (B-9): sc-373692
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BLVRB Plasmide Double Nickase (m) | sc-433230-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino *Blvrb* codifica la biliverdina reduttasi B (BLVRB), un ossidoreduttasi NAD(P)H-dipendente che catalizza la conversione della biliverdina in bilirubina e contribuisce al catabolismo cellulare dell’eme e all’omeostasi redox. L’attività di BLVRB si intreccia con le risposte allo stress ossidativo modulando i pool intracellulari di tetrapirroli e influenzando la capacità di tamponamento delle specie reattive dell’ossigeno nelle cellule eritroidi e in altre cellule metabolicamente attive. Oltre ai ruoli nella gestione di ferro/eme e nella biologia antiossidante, un’alterazione del metabolismo biliverdina–bilirubina è stata associata a contesti di segnalazione infiammatoria e a una maggiore suscettibilità al danno ossidativo. *Blvrb* è quindi un bersaglio utile per analizzare come il turnover dell’eme e gli enzimi redox plasmino le vie di stress cellulari e il fenotipo.
BLVRB Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Blvrb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Blvrb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Blvrb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Blvrb interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.