BLOS1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406825-ACT

BLOC1S1 codifica BLOS1, una subunità centrale del complesso 1 per la biogenesi degli organelli correlati ai lisosomi (BLOC-1), che supporta lo smistamento endosomiale e il traffico del carico necessari per la normale funzione degli organelli correlati ai lisosomi. Attraverso il suo ruolo nella maturazione delle vescicole e nella consegna delle proteine di membrana, BLOS1 contribuisce a processi cellulari che includono il turnover proteico, l’omeostasi degli organelli e la secrezione regolata. L’alterazione dei componenti di BLOC-1 è stata associata a difetti nelle vie di traffico intracellulare, con rilevanza per fenotipi neurosviluppo e neuropsichiatrici, nonché a modificazioni della biologia degli organelli immunitari e dei pigmenti. Di conseguenza, BLOC1S1 è spesso studiato in modelli di disfunzione endolisosomiale e nella regolazione a livello di via del trasporto intracellulare.

BLOS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BLOC1S1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BLOS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BLOC1S1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BLOC1S1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BLOS1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BLOC1S1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BLOS1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BLOS1 nelle cellule tumorali con espressione di BLOC1S1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.