BLM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419336

Panoramica

Blm codifica l’elicasi del DNA BLM della famiglia RecQ nel topo, un fattore centrale per il mantenimento del genoma che limita la ricombinazione omologa aberrante e contribuisce a risolvere le forcelle di replicazione bloccate. BLM agisce insieme alla topoisomerasi IIIα, a RMI1/2 e ad altre proteine di riparo per processare gli intermedi di ricombinazione, promuovere una riparazione accurata delle rotture a doppio filamento del DNA e supportare la progressione della fase S. Attraverso i suoi ruoli nelle risposte allo stress replicativo, nella stabilità dei telomeri e nella segnalazione dei checkpoint, BLM influenza l’accumulo di mutazioni e i riarrangiamenti cromosomici. Un’attività di BLM deregolata è associata a fenotipi di instabilità genomica aumentata, di ampia rilevanza per studi di biologia del cancro, segnalazione del danno al DNA e mantenimento del genoma associato all’invecchiamento.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BLM (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Blm in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Blm insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Blm a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BLM.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Blm per lo studio della segnalazione di BLM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Blm critici per la funzione di BLM
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Blm per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BLM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BLM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Blm. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BLM Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BLM (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Blm per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Blm definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.