BIGM103 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-426620-ACT

Slc39a8 codifica um transportador de íons metálicos da família ZIP, implicado na captação celular de cátions divalentes, particularmente manganês, sustentando a atividade de enzimas dependentes de metais e a homeostase redox em tecidos de camundongos. Ao modular a disponibilidade intracelular de manganês, o BIGM103 influencia processos como glicosilação, função mitocondrial e vias de sinalização inflamatória que dependem de metaloenzimas e de um equilíbrio adequado de cofatores. Alterações na expressão de Slc39a8 têm sido associadas a respostas imunes modificadas e fenótipos metabólicos, o que o torna relevante para estudar como o transporte de micronutrientes se conecta à sinalização celular e à fisiologia sistêmica. Este gene é frequentemente investigado em modelos de desregulação da homeostase de metais e de biologia de traços complexos, nos quais o suprimento de cofatores dependente de transportadores pode remodelar a atividade de vias a jusante.

BIGM103 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Slc39a8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BIGM103 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Slc39a8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Slc39a8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BIGM103. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Slc39a8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BIGM103 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BIGM103 em células tumorais com expressão de Slc39a8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.