BECN1/Beclin-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400139-NIC

BECN1 (Beclin-1) è un regolatore fondamentale dell’avvio dell’autofagia e della nucleazione dell’autofagosoma, grazie al suo ruolo nell’assemblaggio del complesso PI3K di classe III con PIK3C3/VPS34, ATG14 e UVRAG. Coordinando la produzione di fosfatidilinositolo 3-fosfato nei fagofori nascenti, Beclin-1 collega il sensing dei nutrienti e le risposte allo stress alle vie di degradazione lisosomiale, influenzando la proteostasi, il controllo qualità degli organelli e la segnalazione immunitaria innata. L’attività di BECN1 è modulata da interazioni con proteine della famiglia BCL2 e da eventi di fosforilazione che integrano segnali provenienti da mTOR, AMPK e dalle vie apoptotiche. La disregolazione dell’autofagia dipendente da BECN1 è stata associata a neurodegenerazione, biologia delle infezioni e adattamento cellulare correlato al cancro, rendendolo un nodo frequentemente studiato nelle reti di omeostasi e risposta allo stress.

BECN1/Beclin-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BECN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BECN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BECN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BECN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.