BDNF CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419319-ACT

マウスBdnfは、脳由来神経栄養因子（BDNF）をコードしている。BDNFは分泌型のニューロトロフィンであり、TRKB/NTRK2およびp75NTRに結合して、神経細胞の生存、分化、シナプス可塑性、ならびに活動依存的な回路リモデリングを調節する。BDNFシグナル伝達はMAPK/ERK、PI3K–AKT、PLCγ経路を介して、転写プログラム、樹状突起スパイン動態、神経伝達物質放出を調整する。中枢神経系においてBDNFは学習・記憶過程の中核を担い、経験依存的可塑性にも寄与する。Bdnfの発現やシグナル伝達の変化は、神経発達および神経精神疾患に関連する表現型と結び付けられており、神経変性、ストレス応答性、代謝制御のモデルにおいても広く研究されている。

BDNF CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Bdnfの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BDNF CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Bdnf 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBdnf転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BDNFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBdnf遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBDNF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBdnf発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBDNF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。