Bcr Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431007

Panoramica

Il gene Bcr (breakpoint cluster region) del topo codifica una proteina di segnalazione multidominio con attività chinasica serina/treonina e un dominio C-terminale RhoGAP (GTPase-activating) per GTPasi della famiglia Rho, contribuendo alla regolazione della dinamica del citoscheletro, dell’adesione e della migrazione cellulare. BCR partecipa alla trasduzione del segnale dipendente dalla fosforilazione e può modulare vie delle piccole GTPasi che influenzano la proliferazione e le risposte allo stress. In ambito ematopoietico, BCR è noto soprattutto come partner di fusione con ABL1 nella segnalazione leucemogenica guidata da BCR–ABL, rendendo le sue funzioni fisiologiche rilevanti per comprendere il rimaneggiamento delle vie oncogeniche. Nei modelli murini, la perturbazione di Bcr consente studi meccanicistici sul crosstalk tra chinasi e GTPasi, sul rimodellamento dell’actina e sul controllo della crescita specifico del contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Bcr (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Bcr in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Bcr insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Bcr a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Bcr.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Bcr per lo studio della segnalazione di Bcr, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Bcr critici per la funzione di Bcr
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Bcr per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Bcr CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Bcr CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Bcr. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Bcr Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Bcr (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Bcr per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Bcr definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.