BBS2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404725-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BBS2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BBS2 Double Nickase Plasmid (h) e il BBS2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BBS2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BBS2 Antibody (A-12): sc-365355
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BBS2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404725-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BBS2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404725-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BBS2 codifica un componente centrale del BBSome, un complesso multiproteico necessario per l’assemblaggio del ciglio primario e per il traffico selettivo di recettori di membrana e proteine di segnalazione da e verso il ciglio. Attraverso il suo ruolo nel trasporto ciliare, BBS2 influenza vie chiave dipendenti dal ciglio, tra cui Hedgehog e altre cascate di segnalazione sensoriale che coordinano l’omeostasi cellulare e lo sviluppo dei tessuti. L’alterazione della funzione di BBS2 è associata alla sindrome di Bardet–Biedl e a fenotipi correlati di ciliopatia, rendendolo un bersaglio ampiamente utilizzato per studiare i meccanismi della disfunzione ciliare. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di BBS2 consente di analizzare la localizzazione dei recettori, la dinamica del trasporto vescicolare e le risposte trascrizionali a valle associate a una segnalazione ciliare alterata.
BBS2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BBS2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BBS2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BBS2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BBS2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.