Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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BACE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423847
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BACE Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico BACE, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BACE Antibody (61-3E7): sc-33711
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BACE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423847 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino **Bace1** codifica la β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1 (BACE), una proteasi aspartilica che avvia il processamento amiloidogenico di APP per generare peptidi Aβ. L’attività di BACE1 interseca il traffico endosomiale e la proteolisi intramembrana regolata, influenzando il turnover delle proteine neuronali e la funzione sinaptica. Nel sistema nervoso, l’espressione di **Bace1** e l’attività proteasica sono ampiamente utilizzate come punti di ingresso molecolari per studiare il processamento di APP, la fisiologia assonale e la proteostasi. Vie di clivaggio dipendenti da BACE1 deregolate sono fortemente collegate alla biologia dell’amiloide e a meccanismi rilevanti per la neurodegenerazione nei modelli sperimentali.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BACE (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Bace1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Bace1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Bace1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BACE.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Bace1 per lo studio della segnalazione di BACE, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Bace1 critici per la funzione di BACE
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Bace1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal BACE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BACE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Bace1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal BACE Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BACE (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Bace1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Bace1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.