Autotaxin Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-422180-LAC

Enpp2 codifica a autotaxina, uma lisofosfolipase D secretada que converte lisofosfatidilcolina em ácido lisofosfatídico (LPA), um mediador lipídico bioativo que sinaliza por meio de receptores de LPA para regular a migração celular, a remodelação do citoesqueleto, a proliferação e a sobrevivência. Em tecidos de camundongos, a sinalização autotaxina–LPA contribui para o desenvolvimento vascular e linfático, o tráfego de células imunes e a remodelação da matriz extracelular, integrando-se a cascatas de sinalização de GPCR como RhoA/ROCK, PI3K–AKT e MAPK/ERK. A atividade desregulada de ENPP2/autotaxina e a produção de LPA estão associadas a processos inflamatórios e fibróticos e têm sido estudadas na biologia do microambiente tumoral, na angiogênese e em fenótipos associados à metástase. Como enzima solúvel, a autotaxina também oferece um ponto de intervenção acessível para investigar a dinâmica da sinalização lipídica em meio condicionado e no espaço extracelular.

As Partículas de Ativação Lentivirais Autotaxin (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Enpp2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Autotaxin (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Enpp2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Autotaxin. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Enpp2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.