Autotaxin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422180-ACT

Enpp2 codifica a autotaxina, uma lisofosfolipase D secretada que converte lisofosfatidilcolina em ácido lisofosfatídico (LPA), um potente mediador lipídico que sinaliza por meio de GPCRs para regular a migração celular, a proliferação, a sobrevivência e a dinâmica do citoesqueleto. A produção de LPA impulsionada pela autotaxina molda a sinalização extracelular em compartimentos vasculares, imunes e estromais, influenciando a angiogênese, a inflamação e a remodelação da matriz extracelular. Em modelos murinos, a atividade de Enpp2 é frequentemente analisada em contextos de lesão e reparo tecidual, fibrose, desregulação metabólica e fenótipos associados ao microambiente tumoral, nos quais a sinalização por LPA pode reprogramar o estado celular e a motilidade. Seu papel enzimático também conecta o metabolismo de lipídios a programas transcricionais a jusante associados a Rho/ROCK, MAPK/ERK, PI3K/AKT e YAP/TAZ.

Autotaxin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Enpp2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Autotaxin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Enpp2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Enpp2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Autotaxin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Enpp2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Autotaxin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Autotaxin em células tumorais com expressão de Enpp2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.