ATRX Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400454-ACT

ATRX (síndrome de talassemia alfa/deficiência intelectual ligada ao X) codifica um remodelador de cromatina dependente de ATP, semelhante ao complexo SWI/SNF, que atua em parceria com a DAXX para depositar a variante de histona H3.3 em heterocromatina repetitiva, telômeros e regiões pericentroméricas. Ao regular o posicionamento de nucleossomos, os padrões de metilação do DNA e a organização da cromatina em níveis superiores, o ATRX influencia o controle transcricional, a estabilidade da forquilha de replicação e as respostas a danos no DNA. A perda ou disfunção de ATRX está associada à desregulação epigenética e à instabilidade genômica e é frequentemente estudada no contexto de transtornos do neurodesenvolvimento e de vias de manutenção de telômeros relacionadas ao câncer.

ATRX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATRX sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ATRX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATRX em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATRX, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ATRX. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATRX nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ATRX no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ATRX em células tumorais com expressão de ATRX silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.