ATPIF1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403038-ACT

ATPIF1 (fattore inibitore 1 dell’ATPasi) codifica una proteina mitocondriale che si lega all’ATP sintasi F1F0 per limitare l’idrolisi dell’ATP quando il potenziale di membrana mitocondriale collassa, contribuendo così a preservare l’ATP cellulare durante lo stress energetico. Modulando l’efficienza della fosforilazione ossidativa e lo stato di accoppiamento, ATPIF1 influenza la bioenergetica mitocondriale, l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno e la riprogrammazione metabolica tra respirazione e glicolisi. La sua attività è collegata al controllo qualità mitocondriale e a vie di segnalazione adattative allo stress che determinano la sopravvivenza e la proliferazione cellulare in condizioni di ipossia o di limitata disponibilità di nutrienti. Un’espressione deregolata di ATPIF1 è stata associata ad alterazioni della funzione mitocondriale nel metabolismo del cancro e a difetti bioenergetici implicati in modelli di malattie cardiometaboliche e neurodegenerative.

ATPIF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ATPIF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ATPIF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ATPIF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ATPIF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ATPIF1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ATPIF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ATPIF1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ATPIF1 nelle cellule tumorali con espressione di ATPIF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.