ATP5J Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419251-LAC

Atp5j codifica ATP5J, una piccola subunità accessoria dell’ATP sintasi mitocondriale F1F0 (Complesso V) che ne supporta l’assemblaggio e la stabilità dell’oloenzima, necessari per un’efficiente fosforilazione ossidativa. Contribuendo alla produzione di ATP e al mantenimento della forza proton-motrice mitocondriale, ATP5J influenza la bioenergetica cellulare, il potenziale di membrana mitocondriale e l’omeostasi redox. La perturbazione dei componenti del Complesso V può modificare i flussi metabolici, aumentare le specie reattive dell’ossigeno e innescare risposte compensatorie allo stress come la mitofagia e la segnalazione integrata dello stress. In quanto nodo centrale del metabolismo energetico, ATP5J è rilevante in modelli sperimentali di disfunzione mitocondriale che si intrecciano con neurodegenerazione, fenotipi cardiometabolici e rimodellamento bioenergetico tumorale.

Le particelle di attivazione lentivirale ATP5J (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Atp5j in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ATP5J (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Atp5j, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ATP5J. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Atp5j e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.