ATP-citrate synthase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430516

Panoramica

Il gene murino **Acly** codifica l’ATP-citrato sintasi (ACLY), un enzima citosolico che converte citrato e CoA in acetil‑CoA e ossalacetato, collegando il flusso di carbonio mitocondriale al metabolismo citoplasmatico. Fornendo acetil‑CoA per la sintesi de novo di acidi grassi e colesterolo, ACLY sostiene la lipogenesi e la biogenesi delle membrane, e contribuisce inoltre ai pool di acetil‑CoA utilizzati per l’acetilazione di proteine e istoni. Questa attività integra il sensing dei nutrienti con vie che controllano l’accoppiamento glicolisi–ciclo di Krebs (TCA), l’omeostasi lipidica e la regolazione epigenetica dell’espressione genica. Una produzione di acetil‑CoA dipendente da ACLY deregolata è stata associata, in modelli rilevanti per la malattia, ad alterazioni del rimodellamento metabolico, della segnalazione infiammatoria e a fenotipi legati alla proliferazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP-citrate synthase (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acly in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acly insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acly a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ATP-citrate synthase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acly per lo studio della segnalazione di ATP-citrate synthase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acly critici per la funzione di ATP-citrate synthase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acly per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ATP-citrate synthase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ATP-citrate synthase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acly. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ATP-citrate synthase Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ATP-citrate synthase (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acly per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acly definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.