Plasmide CRISPR d'Activation (h) Atm: sc-400192-ACT

ATM code la kinase sérine/thréonine Atm, un régulateur central de la réponse aux dommages de l’ADN, rapidement activé par les cassures double brin. Une fois activée, Atm coordonne le contrôle des points de contrôle et la réparation de l’ADN en phosphorylant des substrats clés impliqués dans la recombinaison homologue, l’arrêt du cycle cellulaire et les voies d’apoptose, notamment via la signalisation passant par p53 et CHK2. La fonction d’ATM est intégrée au remodelage de la chromatine et aux réponses au stress réplicatif afin de préserver la stabilité du génome. La dérégulation de la signalisation d’ATM est associée à des phénotypes d’instabilité génomique et est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie du cancer et des maladies héréditaires de réparation de l’ADN.

Atm Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATM sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Atm Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATM dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Atm. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATM natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Atm au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Atm dans les cellules tumorales présentant une expression de ATM silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.