ATF4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400155-ACT

転写活性化因子4（ATF4）はbZIP型の転写因子であり、細胞ストレスシグナルを統合して、アミノ酸代謝、レドックス恒常性、オートファジー、アポトーシスを制御します。ATF4は、eIF2αのリン酸化の下流に位置する統合ストレス応答（ISR）の中心的エフェクターで、小胞体ストレス時にはPERKシグナル伝達と協調して転写プログラムを再編成します。さらにATF4は、ミトコンドリアのストレス応答や栄養感知経路とも交差し、低酸素やプロテオトキシックな条件下で適応的な遺伝子発現を調整します。ATF4活性の破綻は、代謝ストレス下での腫瘍細胞の生存、慢性的なストレスシグナルに関連する神経変性病理、ならびに骨芽細胞の分化プログラムの制御を介した骨生物学との関連が報告されています。

ATF4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATF4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATF4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATF4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATF4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATF4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATF4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATF4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATF4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATF4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。