ATF-5 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-416821-NIC

ATF5 codifica o fator de transcrição ativador 5 (ATF-5), um fator de transcrição do tipo zíper de leucina básico (bZIP) que coordena programas de expressão gênica ligados à adaptação ao estresse celular, à sobrevivência e à manutenção de linhagem. A atividade do ATF-5 é comumente integrada às vias de sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) e da resposta integrada ao estresse (ISR), incluindo a regulação transcricional dependente do eixo PERK–eIF2α–ATF4, e pode influenciar a homeostase mitocondrial e redes transcricionais relacionadas à apoptose. Em muitos sistemas celulares, o ATF-5 sustenta a proliferação e a resistência ao estresse metabólico ou proteotóxico, o que o torna relevante para estudos de sinalização oncogênica, estados de diferenciação e remodelação transcricional induzida por estresse. A expressão desregulada de ATF5 foi relatada em múltiplos contextos tumorais e modelos neurobiológicos, apoiando a investigação de seus alvos downstream e das dependências de vias em fenótipos associados a doenças.

ATF-5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATF5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATF5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATF5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATF5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.