ATF-1/ATF1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400488-ACT

ATF1 codifica il fattore di trascrizione attivante 1 (ATF-1), un fattore di trascrizione bZIP della famiglia CREB/ATF che si lega agli elementi di risposta all’AMPc per modulare l’espressione genica dipendente dagli stimoli. ATF-1 integra segnali a valle delle vie AMPc/PKA e MAPK ed è regolato tramite fosforilazione per coordinare programmi trascrizionali che controllano proliferazione, differenziamento, adattamento allo stress e sopravvivenza. Attraverso etero- e omodimerizzazione con fattori correlati come CREB e membri della famiglia JUN, ATF-1 contribuisce alle dinamiche delle reti trascrizionali che modellano le transizioni dello stato cellulare. Un’attività deregolata di ATF1 e riarrangiamenti cromosomici che coinvolgono ATF1 sono stati collegati a firme trascrizionali oncogeniche in specifici contesti tumorali, a supporto della sua utilità in studi meccanicistici della segnalazione aberrante e del controllo trascrizionale.

ATF-1/ATF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ATF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ATF-1/ATF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ATF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ATF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ATF-1/ATF1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ATF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ATF-1/ATF1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ATF-1/ATF1 nelle cellule tumorali con espressione di ATF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.