Asparagine synthetase Plasmide Double Nickase (m): sc-424181-NIC

Il gene murino **Asns** codifica l'asparagina sintetasi, un enzima citosolico che catalizza la conversione ATP-dipendente di aspartato e glutammina in asparagina e glutammato, mantenendo le riserve intracellulari di asparagina e l'omeostasi dell'azoto. L'attività di ASNS sostiene la biosintesi degli amminoacidi e si integra con programmi di rilevamento dei nutrienti, inclusi la risposta integrata allo stress e la trascrizione regolata da ATF4 durante la limitazione di amminoacidi. L'alterazione della disponibilità di asparagina influenza la traduzione proteica, l'equilibrio redox e la riprogrammazione metabolica, collegando ASNS all'adattamento cellulare in condizioni di stress nutrizionale. Nella ricerca biomedica, **Asns** viene spesso studiato in relazione a vulnerabilità metaboliche, segnalazione dello stress e fenotipi di dipendenza dagli amminoacidi, rilevanti per il metabolismo delle cellule tumorali e per i disturbi del neurosviluppo.

Asparagine synthetase Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Asns nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Asns. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Asns. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Asns interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.