ASM Plasmide Double Nickase (h): sc-401347-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ASM Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ASM Double Nickase Plasmid (h) e il ASM Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SMPD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ASM Antibody (4H2): sc-293189
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ASM Plasmide Double Nickase (h) | sc-401347-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASM Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401347-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMPD1 codifica la sfingomielinasi acida (ASM), un’idrolasi lisosomiale che converte la sfingomielina in ceramide e fosfocolina, influenzando così il turnover degli sfingolipidi e la composizione lipidica delle membrane. La produzione di ceramide dipendente da ASM contribuisce al traffico endolisosomiale, alla funzione dell’asse autofagia–lisosoma, alla segnalazione in risposta allo stress e all’organizzazione di microdomini di membrana che modulano la segnalazione recettoriale. L’alterazione di SMPD1 modifica l’equilibrio sfingomielina/ceramide e incide su vie infiammatorie e apoptotiche legate all’omeostasi cellulare. Difetti genetici di SMPD1 sono associati a una patologia da accumulo lisosomiale compatibile con la malattia di Niemann–Pick di tipo A/B, rendendo SMPD1 un bersaglio ampiamente utilizzato negli studi di biologia dei lisosomi e del metabolismo degli sfingolipidi.
ASM Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMPD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMPD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMPD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMPD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.