ASIC2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403265-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ASIC2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ASIC2ダブルニカースプラスミド（h）およびASIC2ダブルニカースプラスミド（h2）は、ASIC2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ASIC2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403265-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASIC2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403265-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ASIC2（酸感受性イオンチャネルサブユニット2）は、DEG/ENaCファミリーに属する、プロトン作動性でアミロライド感受性の陽イオンチャネルをコードしており、細胞外の酸性化に応答した神経の興奮性や膜の脱分極に寄与します。ヒト細胞では、ASIC2は他のASICサブユニットと会合して、イオン選択性、不活性化（脱感作）動態、pH感受性を調節し、局所的なpH変動をCa2+/Na+流入および下流シグナル伝達へと結び付けます。ASIC2の活性は、シナプス伝達、機械感覚、ならびに細胞外pHが変動する炎症性微小環境のセンシングといった過程と関連します。ASIC2の発現やチャネル機能の変化は、神経生理学および疼痛関連シグナル伝達の観点から研究されており、神経細胞のストレス応答や興奮毒性経路に関する研究にも関連します。
ASIC2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ASIC2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ASIC2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ASIC2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ASIC2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。