ASIC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401452-ACT

O ASIC1 humano (subunidade 1 do canal iônico sensível a ácido) codifica um canal iônico ativado por prótons, permeável ao sódio, da família ENaC/DEG, que responde à acidificação extracelular. O ASIC1 contribui para a excitabilidade neuronal e para a sinalização de cálcio por meio da despolarização da membrana, moldando a transmissão sináptica, a transdução sensorial e a plasticidade dependente de atividade. Ao acoplar flutuações de pH ao fluxo de íons, o ASIC1 se cruza com vias associadas a microambientes isquêmicos e inflamatórios, incluindo respostas ao estresse excitatotóxico e à sinalização neuroimune. A atividade e a expressão desreguladas de ASIC1 têm sido investigadas em modelos de neurodegeneração, dor, comportamentos relacionados à ansiedade e acidose associada a tumores, reforçando sua relevância para estudos mecanísticos da sinalização dependente de pH.

ASIC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ASIC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ASIC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ASIC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ASIC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ASIC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ASIC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ASIC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ASIC1 em células tumorais com expressão de ASIC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.