ARP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405241-ACT

NR2F2 codifica o receptor nuclear órfão humano ARP-1 (COUP-TFII), um fator de transcrição independente de ligante que se liga a elementos de resposta hormonal para coordenar programas gênicos que controlam o destino celular, a angiogênese e a adaptação metabólica. ARP-1 integra-se à sinalização de receptores nucleares e a redes regulatórias de cromatina para modular o padrão de desenvolvimento, as transições epitélio–mesênquima e a especificação vascular. A expressão desregulada de NR2F2 tem sido associada a estados de diferenciação alterados e à reprogramação transcricional observada em fenótipos cardiovasculares congênitos e em múltiplas vias relevantes para o câncer. Em modelos baseados em células, ARP-1 é comumente estudado por seus papéis na seleção de enhancers, em circuitos transcricionais específicos de linhagem e na comunicação cruzada com vias de receptores de esteroides e retinoides.

ARP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NR2F2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NR2F2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NR2F2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NR2F2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARP-1 em células tumorais com expressão de NR2F2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.