Arnt 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403101-ACT

ARNT2 (aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator 2) codifica un fattore di trascrizione bHLH-PAS (basic helix–loop–helix PAS) che eterodimerizza con partner contenenti un dominio PAS, collegando segnali ambientali e di sviluppo ai programmi di espressione genica. In quanto traslocatore nucleare, ARNT2 partecipa a reti trascrizionali sensibili all’ossigeno e agli xenobiotici, integrando segnali che modellano la differenziazione neuronale, l’adattamento metabolico e le risposte allo stress cellulare. La trascrizione regolata da ARNT2 è associata a vie che governano l’espressione genica responsiva all’ipossia e la definizione dei pattern neuroevolutivi, con rilevanza per disturbi che implicano un’alterata regolazione genica neuronale e la segnalazione dello stress. Un’attività deregolata di ARNT2 è stata inoltre studiata nel contesto del rimodellamento delle vie di segnalazione nel cancro e in altre patologie, in cui il controllo trascrizionale bHLH-PAS influenza lo stato cellulare e i programmi di sopravvivenza.

Arnt 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ARNT2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Arnt 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ARNT2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ARNT2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Arnt 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ARNT2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Arnt 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Arnt 2 nelle cellule tumorali con espressione di ARNT2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.